Eppendorf G0.5 µPlate - Handbuch (Seite 27)

Berechnungen
Eppendorf ® μPlate G0.5
Deutsch (DE)
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9 Berechnungen
Bei jeder Messung wird automatisch eine zusätzliche Messung bei einer
Referenzwellenlänge von 340 nm durchgeführt, um Fehler der Extinktionswerte, die
durch Schmutz auf den Außenflächen der Quarz-Wells verursacht sein können, zu
korrigieren.
9.1 Berechnung der Nukleinsäurekonzentration
Nachdem die Extinktionsmessungen der Nukleinsäuren in der μPlate G0.5 durchgeführt
wurden, berechnen die PlateReader AF2200-Software und Excel automatisch die
Nukleinsäurekonzentration nach dem Lambert-Beerschen Gesetz einschließlich der
Referenzwerte.
A = ε * d * c
Allgemein ist die Extinktion A in der analytischen Chemie definiert als:
A
λ
= log
10
(I
0
/I) [OD],
wobei I die Intensität von Licht einer spezifizierten Wellenlänge, das durch eine Probe
hindurchgegangen ist (Intensität des durchgelassenen Lichts), und I
0
die Intensität des
Lichts vor dessen Eintritt in die Probe darstellt.
In der analytischen Chemie werden häufig Extinktionsmessungen durchgeführt, da sich
die Extinktion einer Probe proportional zu der Dicke der Probe und der Konzentration der
absorbierenden Spezies in der Probe verhält. Die Extinktion ist ein logarithmisches Maß
und die Einheit ist [OD].
9.1.1 Beispiel
Ein Extinktionswert von 1 OD bedeutet eine Durchlässigkeit von 10 %, ein
Extinktionswert von 2 OD entspricht einer Durchlässigkeit von 1 % usw. Da
Extinktionsberechnungen auf logarithmischen Maßen basieren, werden Berechnungen
zwischen Extinktions-Probenwerten und Extinktions-Leerwerten per Subtraktion und
nicht per Division ausgeführt. Weitere Informationen finden Sie in der Literatur zum
Lambert-Beerschen Gesetz.
A Extinktion
ε molarer Extinktionskoeffizient (L mol -1 cm -1 )
d Abstand (Durchtrittslänge in cm)
c Konzentration (mol L -1 )