Eppendorf BioPhotometer - Handbuch (Seite 44)

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12 Auswertung
12.1 Nukleinsäuren (dsDNA, ssDNA, RNA, Oligo)
Auswertung über Faktor
C = E 260 x F
C = berechnete Konzentration
E 260 = gemessene Extinktion bei 260 nm
F = Faktor (methodenspezifische Programmierung über Taste )
Besonderheit bei den Nukleinsäuremethoden: Der programmierte Faktor bezieht sich immer auf die Konzen-
trationseinheit "
µ g/mL". Wird die Konzentrationseinheit " µ g/ µ L" gewählt, wird der Faktor intern umgerechnet:
F’ = F / 1000
F’ = umgerechneter Faktor; wird für die Berechnung der Konzentration benutzt.
Probenverdünnung
C
Dil, korr
= C x (V
P
+ V
Dil
) / V
P
C
Dil, korr
= mit Verdünnungsfaktor umgerechnetes Ergebnis
V
P
= Volumen der Probe in der Messlösung (Eingabe über Taste )
V
Dil
= Volumen des Diluents in der Messlösung (Eingabe über Taste )
Schichtdicke der Küvette
Anwendung: Benutzung von Küvetten mit Schichtdicke 1, 2 oder 5 mm.
Die Schichtdicke der Küvette wird methodenspezifisch über die Taste programmiert.
E
Küv, korr
= E x 2 (bei Schichtdicke 5 mm)
E
Küv, korr
= E x 5 (bei Schichtdicke 2 mm)
E
Küv, korr
= E x 10 (bei Schichtdicke 1 mm)
E
Küv, korr
= auf Schichtdicke 10 mm umgerechnete Extinktion
Korrektur E 320
Anwendung: Partielle Korrektur von Verfälschungen der Extinktion durch Trübungen in der Messlösung.
Das Auswerteverfahren mit bzw. ohne Korrektur E 320 wird methodenspezifisch über die Taste program-
miert.
E
x, korr
= E
x
- E 320
E
x, korr
= rechnerisch korrigierte Extinktion bei der Wellenlänge 230, 260 und 280 nm
E
x
= gemessene Extinktion bei der Wellenlänge 230, 260 und 280 nm
E 320 = gemessene Extinktion bei der Wellenlänge 320 nm
Die korrigierte Extinktion wird für die weitere Ergebnisberechnung benutzt.
Taste Conversion: Berechnung der Menge
Anwendung: Berechnung der Nukleinsäuremenge im gesamten Probenvolumen
M = C x V
P, ges
M = berechnete Gesamtmenge an Nukleinsäure im Probengefäß
C = berechnete Konzentration
V
P, ges
= Volumen der Probe im Probengefäß (Eingabe über Taste )
Parameter
Dilution
Dilution
Parameter
Parameter
Conversion
12 Auswertung
12_Auswertg.fm Seite 40 Montag, 20. Februar 2006 10:40 Uhr